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饮用水中大肠杆菌及检测方法

正正在水淨化和污水治理范围,因大肠杆菌正正在粪便中数量极众,故常用为反省水源是否被粪便污染的标志,其测量标准爲大肠菌群指数。此外大肠杆菌普及情况下无害,不会从执行室「遁脱」而破坏人类。诈欺大肠杆菌作爲粪便污染的指示物也可能发生误导性的结论,因爲其它情况如制纸厂中,大肠杆菌也可大量存正正在。 

一、大肠杆菌 
细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的构制有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核,细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁构制折柳,细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚,无荚膜,众发生外毒素;革兰氏阴性菌细胞壁薄,有荚膜,众发生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。 
大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠途杆菌。正正在肠途中一般对人无害,但任何大肠杆菌进入人的泌尿编制,都会对人体发生危害。大肠杆菌正正在基因工程技术中被广泛的运用,它的质粒是最常用的运载体,它也是基因工程中常用的受体细胞。 
二、培养基装备 
微生物生命活动历程中需要的化合物有碳源、氮源、茁壮因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。茁壮因子是微生物茁壮不可缺少的微量有机物,但不一定需要外界补充,有的微生物可以自身合成。正正在提供上述几种浸要养分物质的基础上,培养基还需要满足微生物茁壮对pH、特殊养分物质以及氧气的要求。 
1986文娱平台注册_英皇文娱网址是什么_ag亚逛文娱平台官网一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可正正在LB固体培养基上划线分袂。以下为本执行中培养基装备步骤: 
1.称量:切实称取各因素。蛋白胨0.5g,酵母提取物0.25g,氯化钠0.5g,加水50ml。装备LB固体培养基时还需加1g琼脂。 
2.溶解:加热熔化,用蒸馏水定容到50mL。装备LB固体培养基时还需加琼脂,整体历程不断用玻棒搅拌,目标是防止琼脂糊底而导致烧杯打破。 
3.调pH:用1mol/L NaOH溶液珍摄pH至偏碱性。 
4.灭菌:正正在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基,加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。 
5.倒无味:灭菌后,待固体培养基冷却至60℃控制时正正在酒精灯火焰附近操作进行。其历程是: 
①将灭过菌的培养皿放正正在火焰旁,右手拿装有培养基的三角瓶,左手拔出棉塞; 
②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通过火焰; 
③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缺陷,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖; 
④待无味冷却凝固后,将无味倒过来陈设。 
倒过来陈设的目标是防止培养基冷却历程中形成的水滴落到培养基外表。向培养皿中转移已灭菌的培养基时,也不要把培养基沾正正在皿壁上。不然,空气中杂菌会正正在这些粘附培养基上繁殖,并污染皿内培养基。 
三、灭菌和消毒 
1.无菌技术: 
①对执行操作空间、操作家的衣着和手进行干净和消毒; 
②将培养器皿、接种用具和培养基等用具进行灭菌; 
③为避免范围微生物污染,执行操作应正正在酒精灯火焰旁进行; 
④避免已灭菌治理的材料用具与范围的物品相接触。 
2.消毒方法: 
①日常保存经常用到的是煮沸消毒法; 
②对一些不耐高温的液体,则运用巴氏消毒法; 
③对接种室、接种箱或超净工作台起首喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果,然后运用紫外线进行物理消毒; 
④执行操作家的双手运用酒精进行消毒。 
3.灭菌方法: 
①接种环、接种针、试管口等运用灼烧灭菌法; 
②培养基、无菌水等运用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅; 
③外表灭菌和空气灭菌等运用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。 
4.比拟消毒和灭菌: 
比拟项         理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 
消毒         较为温和         限制保存状态的微生物         不行 
灭菌         强烈         全部微生物         能 
5.帮理事项: 
①执行顶用的棉花不行用脱脂棉,因脱脂棉易吸水,吸水后搪塞制成污染。灭菌后,通常正正在60~80℃烘箱中除去灭菌时的水分; 
②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要起首打开排气阀,煮沸并排除锅内冷空气,其目标是有利于锅内温度升高,随后封合排 
气阀继续加热,加热结束切断热源后,要使温度自然降低,气压务必降至零时打开锅盖,其目标是防止容器中的液体暴沸; 
③正正在用任何器皿转接时,瓶塞和封口膜只可夹正正在手上,不许放正正在台面上,接种时要正正在酒精灯火焰旁操作; 
④培养基一定不行沾正正在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上,不然搪塞污染; 
⑤接种时要胆大心细,行为敏捷,这是镌汰污染的关键; 
⑥接种后,培养皿必须倒放(盖正正在下方)正正在恒温培养箱中,如正放则水蒸气正正在盖上凝成水滴,滴到接种后的培养基外表, 
水流扩散会使菌落扩散,就很难形成单菌落了。 
四、细菌的分袂 
1.划线分袂法:用接种环蘸菌液后正正在含有固体培养基的培养皿无味上划线,正正在划线历程中菌液逐渐镌汰,细菌也逐渐镌汰。划线到着末,可使细菌间的距离加大。正正在培养10~20h后,可由一个细菌发生单菌落,菌落不会浸叠。如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上,正正在斜面上划线,则每个斜面的菌群就是由一个细菌发生的后代。 
其操作步骤是:将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态,正正在火焰旁将培养皿稍微打开。正正在此同时,用环状接种针正正在火焰旁取少许菌悬液,迅速送入培养皿内,正正在无味培养基的一边,作第1次平行划线 3~5条,转动培养皿约70°角,用烧过冷却的接种针,通过第1次划线限制作第2次平行划线,然后再用同样方法,通过第二次平行划线限制作第三次平行划线和通过第三次平行划线限制作第四次平行划线。划线时,接种针应与无味外表成30°角控制。不要使接种针碰到培养皿边缘,也不要将培养基划破。划线杀青后,盖上皿盖,颠倒于恒温箱培养。 
取菌种前灼烧接种环的目标是消灭接种环上的微生物;除第一次划线外,其余划线前都要灼烧接种环的目标是消灭接种环上残留菌种;取菌种和划线前都要求接种环冷却掉队行,其目标是防止高温杀死菌种;着末灼烧接种环的目标是防止细菌污染情况和操作家。 
2.涂布分袂法:先将培养的菌液稀释,通常稀释到10-5 ~10-7之间,然后取0.1ml折柳稀释度的稀释菌液放正正在培养皿的固体培养基上,用玻璃刮刀涂布正正在培养基平面长进行培养,正正在适当的稀释度下,可发生相互离开的菌落。通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为悦目。将每个菌落分别接种正正在斜面上扩增培养后,再做功能性执行。 
划线分袂法,方法简单;涂布分袂法,单菌落更易离开,但操作复杂些。细菌的两种分袂法各有优点,都可采用。 
五、菌落和菌种品种的辨认 
单个细菌用肉眼是看不睹的,可是,当单个或少数细菌正正在固体培养基上大量繁殖时,便会形成一个肉眼可睹的、具有一定形状构制的子细胞群体,叫做菌落。折柳品种的细菌所形成的菌落正正在大小、形状、颜色、光华度、透明度等方面具有一定的特征。 
细菌的菌落外表一般是润滑而潮湿的,有黏稠性,普及透明或半透明,但也有细菌的菌落外表是干燥、有褶皱的;放线菌由于有纤细的菌丝并可发生孢子,以是菌落外表是紧密的绒状、稳定众皱,长孢子后就成粉末状,由于菌丝和孢子有众种色素,以是正正在菌落培养基底部和菌落外表都有折柳的颜色,菌落不易用接种环挑动;酵母菌落雷同于细菌菌落,外表润滑而潮湿,有黏稠性但大众呈乳白色,少数呈红色。 
如果菌落无法辨认,只有借帮于显微镜观察。正正在显微镜下细菌一般为杆状、球状和弧状,直径都正正在1um控制;放线菌菌丝是没有横隔的分枝丝状体,气生菌丝顶端星散成串状孢子,孢子丝有直线形、螺旋状、弯曲式或轮生等;酵母有卵圆型或丝状,但卵圆形细胞大于细菌,直径约5~7um。 

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